蛋白TM值检测实验介绍一、技术概述蛋白TM值（Thermal Melting point）检测是一种评估蛋白质热稳定性的关键技术，通过监测蛋白质在不同温度下的构象变化（如变性），利用荧光染料（如SYPRO Orange）结合疏水区域释放荧光的特性，实时测定蛋白质的熔点温度（Tm）。该技术为蛋白质工程优化、药物靶点筛选及制剂开发提供重要数据支持。‌二、实验目的

本实验通过SYPRO Orange染料法测定目标蛋白的Tm值，通过绘制溶解曲线量化其热稳定性，用于评估突变对蛋白稳定性的影响、筛选稳定蛋白的缓冲液配方，或验证药物分子与靶蛋白的结合效应。

三、实验流程

1.测试体系配制：

1）按照下列组分配制TM反应液。为了保证反应液配制的准确性，减少分装造成的误差，应按照比实际用量稍大的体积配制反应液，最后加入样品。

试剂组分使用量(uL)DSF buffer5蛋白10水5

2）按如下程序进行预反应：

25℃,15min；

3)上体系中加入5 uL SYPRO® Orange

4）采用溶解曲线法检测:

温度：25℃/2min 0.05℃/s（连续采集信号） 95℃/2min:

四、技术优势

✅ 高灵敏度：可检测低至微克级的蛋白样品

✅ 无需标记：基于非共价荧光染料，保留蛋白天然构象✅ 多功能性：兼容多种应用场景（缓冲液优化、药物结合分析等）

四、适用范围

1️⃣ 蛋白质工程（突变体稳定性评估）

2️⃣ 药物靶点热稳定性研究（小分子结合效应验证）

3️⃣ 制剂开发（筛选提高蛋白稳定性的缓冲液配方）

4️⃣ 抗体药物开发（评估Fab/Fc段热稳定性）

‌五、代表性实验结果

蛋白TM值检测实验数据和样品溶解曲线

七、客户提供1细胞样品＞4×107；动物组织＞100mg（黄豆粒大小）；植物组织＞5g2物种信息及基因信息

（注：组织样品需液氮速冻、保存于-80度，样品使用干冰寄送）

如您希望进一步了解该实验的技术细节、数据展示或定制化服务，欢迎联系我们的科研服务团队！

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