支原体定性检测实验技术介绍一、技术概述支原体定性检测是一种基于特异性引物扩增支原体保守基因片段（如16S rRNA或基因组保守区）的分子生物学技术，通过PCR或荧光定量PCR（qPCR）方法，快速、灵敏地判定样本中是否存在支原体污染。二、实验目的

本实验通过检测样本中支原体特异性核酸片段，定性评估细胞培养物、生物制剂或临床样本是否受到支原体污染，为细胞治疗产品、疫苗生产及科研实验提供关键质量控制依据。

三、实验流程

1、DNA抽提

样本按照“血液 _ 细胞 _ 组织基因组 DNA 提取试剂盒”试剂盒说明书步骤进行提取，提取的DNA用分光光度计进行浓度检测。

2、PCR扩增

1）1st PCR反应

1. 按以下的顺序配制反应混合液。

成分加入量灭菌水19MCGp F1 Primer0.5μLMCGp R1 Primer0.5μL2 × Taq Plus Master Mix II25μL

2.向以上反应混合液中加入5 μl检测样品，使总体积达到50 μl。添加样品时防止交叉污染。

3.设定以下条件，进行PCR反应。

循环数温度时间195℃3min3095℃15sec55℃20s72℃40s172℃5min

2）2nd PCR反应

1. 按以下的顺序配制反应混合液。

成分加入量灭菌水23.5MCGp F2 Primer0.5μLMCGp R2 Primer0.5μL2 × Taq Plus Master Mix II25μL

2.向以上反应混合液中小心加入0.5μl 1st PCR反应产物，注意防止交叉污染。

3.设定以下条件，进行PCR反应。

循环数温度时间195℃3min3095℃15sec55℃20s72℃40s172℃5min

3、扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳

四、技术优势

✅ 高灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的支原体DNA

✅ 特异性强：针对保守基因设计引物，避免细菌或宿主DNA干扰

✅ 快速高效：检测周期短，且支持批量样本检测

四、适用范围

1️⃣ 细胞治疗产品（干细胞、CAR-T细胞）的支原体污染筛查

2️⃣ 生物制药（疫苗、单抗）生产过程中的无菌监控

3️⃣ 科研实验室细胞库的定期质控

4️⃣ 食品工业中转基因成分的定量分析

5️⃣ 医疗器械（生物材料、植入物）的微生物安全评估

六、代表性实验结果

支原体定性检测_琼脂糖凝胶电泳图

七、客户提供1细胞样品: ＞2×107；细胞培养上清≥1ml动植物组织/细菌、真菌样品: ＞100mg（黄豆粒大小）；血清、血浆、全血及其他体液样品: ＞200μl；RNA/DNA/cDNA: v≥10μl，c≥50ng/μl2注明样本类型、保存条件及可能干扰物（如抗生素、裂解液）

（注：液体样本需冰袋运输，冻存样本建议使用干冰；DNA样本避免反复冻融。）

如您希望进一步了解该实验的技术细节、数据展示或定制化服务，欢迎联系我们的科研服务团队！