在生物学研究领域，从细胞中提取总蛋白是一项至关重要的基础实验操作，它为后续众多深入研究，如蛋白质组学分析、酶活性测定等提供关键样本。下面就来详细介绍其步骤。

首先是细胞收集环节。若是贴壁细胞，需要先用胰蛋白酶适度消化，使细胞从培养皿表面脱离，随后将细胞悬液转移至离心管，以合适的转速（通常 1000 - 1500 rpm）离心 5 - 10 分钟，弃去上清液，沉淀即为收集好的细胞；悬浮细胞则可直接通过离心收集。这一步务必操作轻柔，避免细胞破裂导致蛋白提前释放与降解。

细胞收集完成后，进入裂解步骤。向细胞沉淀中加入适量的裂解液，裂解液成分依据细胞类型和后续实验需求调配，一般含有去污剂、蛋白酶抑制剂等。去污剂能破坏细胞膜结构，促使细胞内容物释放，蛋白酶抑制剂则可防止蛋白被内源酶降解。轻柔吹打混匀后，将样本置于冰上孵育一段时间，通常 15 - 30 分钟，期间可间歇性涡旋，确保细胞充分裂解。

裂解结束，需进行离心以分离蛋白。将样本在低温高速离心机中，以 12000 - 15000 rpm 转速离心 10 - 15 分钟，此时上清液即为含有总蛋白的粗提物，而沉淀部分大多是未裂解的细胞碎片、细胞核等杂质。

后续还要对提取的总蛋白进行定量，常用的方法有 Bradford 法、BCA 法等。这些方法基于蛋白质与特定试剂反应产生颜色变化，通过分光光度计测定吸光度，再依据标准曲线计算蛋白浓度，从而精准知晓所提取蛋白的含量，方便后续实验按比例取用。

从细胞中提取总蛋白的每一步都要求严谨细致，任何细微疏忽都可能影响蛋白质量与产量。科研人员只有熟练掌握并严格遵循流程，才能成功获取高质量的总蛋白样本，为前沿探索铺就坚实基石，助力解开生命科学诸多谜题。