养过贴壁细胞的小伙伴们，肯定都碰到过细胞聚团的烦心事。原本期待细胞们乖乖地在培养器皿底部均匀分布、茁壮成长，结果一看，细胞这儿一团、那儿一簇，。这不仅影响细胞计数的准确性，对后续实验开展也是个大麻烦，培养都成问题。
细胞聚团主要有以下几原因：
消化操作不当：吹打太用力，细胞破裂死亡后释放出 DNA，会让其他细胞粘连成团；消化时间没把控好，过久则细胞受损严重，最后聚团。
离心过猛：离心速度过大、时间太长，细胞在这高速旋转、长时间折腾下，形成聚团。
消化程度不合理：消化不完全，细胞和细胞之间的连接未完全断裂；消化过度，圆形的细胞们聚合在一起难以分开。
细胞状态不佳：换液不及时，细胞缺少营养；长得
太满，细胞们挤在一起；遭遇污染，细胞被污染侵袭，这些情况都会导致细胞老化、状态变差，进而聚团。
传代不均：传代时没有把细胞悬液吹打均匀，有的地方细胞团扎堆，培养时自然就聚团。
培养条件不妥：非震荡培养，容易聚集；细菌或细胞量过多，空间拥挤，细胞就会聚团。
二、对症下药（一）优化消化流程首先，吹打细胞悬液时，要轻柔且彻底，用移液器缓慢、多次地吹打，确保细胞团都被打散成单个细胞。选择正确的胰酶浓度和消化时间，不同细胞系有不同的消化情况，像 HeLa 细胞消化时胰酶浓度 0.25%、消化 2 - 3 分钟就行；而 A549 细胞则需要 0.5% 胰酶、3 - 5 分钟。
消化时，轻轻晃动培养器皿，让胰酶均匀作用，看到细胞回缩、变圆，有少量脱落，赶紧终止消化，用含血清培养基中和胰酶。对于贴壁牢固的细胞，比如 MDCK，分多批多次消化，每次消化一点，最大程度减少损伤。
（二）调整培养条件血清选高质量、口碑好品牌的血清，新批次来了，先小范围试用，和旧批次对比，看看细胞生长、贴壁情况，没问题再大规模用。
给细胞足够生长空间，根据细胞生长速度、大小，合理选择培养器皿；接种密度别为70% - 80% 汇合度为佳。培养基的 pH 值、渗透压、营养成分一个都不能马虎，定期检测调整。传代时严格按 SOP 操作，动作轻柔、迅速，保持细胞的良好状态。
（三）培养中的其他注意要点用无钙镁平衡盐溶液（PBS）洗涤细胞，能有效减少细胞间粘性。培养器选塑料材质亲水性、细胞贴壁性和玻璃不同，根据细胞喜好选，新器皿用前彻底清洗、灭菌，去除残留杂质。培养环境要无菌、干净、稳定，定期打扫培养箱，监测温湿度、CO₂浓度。日常多观察细胞，看看形态、密度、抱团情况，早发现问题早解决。
三、日常维护，预防细胞聚团复发细胞培养日常维护必须到位，才能让细胞远离 聚团困扰。定期用显微镜观察细胞，看看形态、密度，一旦发现异常，立马调整。培养箱得保持温度稳定在 37℃左右，CO₂浓度 5%，湿度也得适宜，定期清洁、消毒，操作流程要严格规范，减少失误。还有，做好记录，细胞状态、消化时间、培养基批次等信息都详细记下，下次遇到类似情况，就能迅速对症下药。
