v-NKT免疫细胞治疗过程中有一项流程是血细胞分离单采，是指外周血单个核细胞的采集分离技术。有人就问了，血细胞分离技术是什么？采的是什么细胞？血细胞分离单采又是个什么过程呢？今天就来介绍一下：血液分离是指用机器分离血液中的细胞和可溶性成分的过程。在血细胞分离单采术中，血液中的细胞成分，例如红细胞（RBC），白细胞（WBC），血小板等被分离出来。v-NKT细胞治疗中的单采是收集外周血中的白细胞（WBC）成分用于癌症的免疫治疗（过继免疫治疗）。
v-NKT细胞治疗为什么要进行单采？v-NKT细胞在人体外周血中的浓度相对较低，因此，若使用全血分离的方法来收集足够的种子细胞，可能进行一次治疗需要抽取供血者高达400毫升的全血（含有红细胞的血液），大概相当于一位正常成年人总血量的十分之一左右。而成人一次献血在200~300毫升，因此采用全血分离v-NKT细胞显然不合适。那么，为了获得足够量的种子细胞用于长期治疗，选择使用单采的方法，一次采集可以供应患者10次左右的治疗量。
v-NKT细胞治疗中单采是什么样子？v-NKT细胞的单采是指利用血液成分分离机采集患者的血液，将白细胞（WBC）中的单个核细胞分离出来。预计采集的体积为80-100毫升，最少不低于50毫升，为单个核细胞和血浆成分，基本不含红细胞。
采集人员根据收集管色彩调整收集速度，成人血液流速多设定在50~70ml/min。根据患者静脉通路的状况以及所需处理的全血量，整个细胞分离过程通常需要2到4小时完成。血细胞单采机它的外形有点像家用的移动式洗衣机，只不过比洗衣机的个头要大点。
图1：血细胞分离单采的过程图
单采机的工作原理是什么？其工作原理是通过特制的封闭管路，使供血者的部分全血通过血细胞分离机进行体外循环—---从供血者的全血中提取相应成份的血细胞，再将剩余血液还输给供血者的闭环过程。基于它的封闭管路，因此，对于供血者来说是十分安全的。
血细胞分离机的工作是将特制全密闭管路内的体外循环全血通过离心机进行离心，根据血液各成分的密度差异，利用梯度离心原理，将全血分离成不同成分的层面，通过界面探测器识别不同成分的血细胞后进行对应层面的提取，然后将剩余部分的血液还输给供血者，经过多次的循环后达到所需要血细胞量后结束采集。操作过程由计算机控制，简单方便，最大限度地控制了分离过程中的污染以及肝炎、艾滋病等的传播。
单采血是采的血常规中的哪部分？根据血细胞分离机的原理，我们设定选择梯度离心后的单个核细胞层，采用一次性密闭式分离管道，可以有效使用这一程序采集包括单核细胞、淋巴细胞在内的单个核细胞（MNC）。
图2：外周血中各种细胞的分布比例，绿色框出的部分为单核细胞、淋巴细胞在内的单个核细胞（MNC）
外周血白细胞起源于骨髓的造血干细胞，白细胞包括粒细胞、淋巴细胞和单核细胞三大类，其中粒细胞又分为中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。我们通常在医院检查的白细胞计数（WBC）是测定血液中各种白细胞的总数，如图3。v-NKT细胞治疗中单采的单核细胞、淋巴细胞就是血常规检查中可以看到的这两项指标。我们可以看到这两类细胞大约占白细胞总量的24%-52%；在白细胞中占比最大的（50%-75%）中性粒细胞不在我们采集之内，是会再输送回人体内。而且外周血中的淋巴细胞会很快速地从淋巴结、脾脏等免疫器官调动补充到外周血中，促进外周血内淋巴细胞的更新。
图3：血常规检测项目中红色框出的单核细胞、淋巴细胞为单采所采集的单个核细胞（MNC）
单采前要做什么评估与检查？单采血前，医生需要对患者的身体安全情况进行评估，以期预防或减少单采相关不良反应。评估项目包括采集对象的原发病和全身基本情况，包括病史、疾病相关症状、生命体征、静脉情况、药物过敏史并进行相关实验室检查。
图4：供血者在单采前要做的评估与检查概况（图片来源于网络）
单采的方式对供血者的身体有损害吗？一些患者会担心单采会不会发生不良反应。其实不必太过担忧，能够进入到采集过程的患者，都是进行了充分的检查及单采前准备，且无论是单采前、单采过程中还是采集后，医护人员都会做好相应准备，确保单采能够顺利进行。
而且就像前文所说的，健康人淋巴细胞几个小时就能恢复正常；单采前也会把供血者的血常规检查数据输入到单采机里面，所以整个过程会在身体健康承受范围内进行。当然，单采过程中也可能出现一些不良反应，但大多数轻微可控，如疼痛、恶心、呕吐、头痛和感觉异常。出现这些症状的原因，有可能是使用抗凝剂等药物的一过性副作用，建议密切观察和及时处理。 如果出现上肢端末稍及口唇麻木的症状，也是因为使用的抗凝剂会一过性结合外周血中的钙离子，我们会建议单采前服用葡萄糖酸钙口服液和多喝一些温水，一般不会出现较明显症状。如果出现症状，及时再补充葡萄糖酸钙口服液。
血细胞单采技术已经有几十年的历史了，非常成熟。通过对供血者的密切观察和严格的操作程序，可以妥善处理过程中出现的风险。同时v-NKT细胞治疗单采的是淋巴细胞、单个核细胞，并不是所有的白细胞（WBC），且健康人的这些细胞会很快得到恢复（几个小时），并不会对供血者有大的损害。
参考来源：
Connelly-Smith L, Alquist CR, Aqui NA, et al.Guidelines on the Use of Therapeutic Apheresis in Clinical Practice - Evidence-Based Approach from the Writing Committee of the American Society for Apheresis: The Ninth Special Issue. J Clin Apher 2023;38(2):77-278.doi:10.1002/jca.22043
撰稿人：曹亭亭
审核：乔佳程、王瑛、高辰
编辑/排版：赵团团
