一、研究背景

亚硝胺杂质有两种结构类别：

一是小分子亚硝胺杂质，与API结构不相似且存在于许多不同的药品中的亚硝胺杂质，如N-亚硝基二甲胺(NDMA)、N-亚硝基二乙胺(NDEA)、N-亚硝基甲基苯胺(NMPA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基异苯乙胺(NIPEA)、N-亚硝基二丁胺(NDBA)和N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）等；

二是NDSRIs杂质，其结构与API相似（化学结构中含有API或API片段）且通常每种API对应唯一的NDSRI杂质。该类杂质是通过含有二级、三级或四级胺的API（或API片段）在暴露于亚硝化化合物（例如辅料中的亚硝酸盐杂质）时发生亚硝化而形成的。

下图显示了结构中含有二级胺官能团的API与亚硝酸盐在酸性条件下的代表性反应。

2024年9月4日，FDA公布了最新的《人用药中亚硝胺杂质控制》指南，指南中规定药品生产商必须对药物中亚硝胺杂质进行充分的研究，尤其对NDSRIs杂质进行强调说明。FDA要求所有化学合成原料药的制造商都应采取适当行动，降低原料药中亚硝胺杂质的风险，因为这些原料药有可能形成亚硝胺类。此外API制造商应审查其API生产工艺，并进行风险评估，以确定亚硝胺杂质的可能性。如果确定存在亚硝胺杂质的风险，则应使用灵敏且经过适当验证的方法对批次进行验证性测试。如果适当的风险评估确定不存在亚硝胺杂质的可能性，或者确定存在风险但未检测到亚硝胺，则不需要采取进一步行动。如果检测到亚硝胺杂质，API制造商应调查根本原因，采取适当的后续行动，包括改变生产工艺，以减少或防止亚硝胺杂质的形成。

指南一经发布，多家药企收到FDA或CDE的发补通知，近日我院也收到了多家客户针对NDSRIs杂质补充研究需求，品种涉及双氯芬酸、富马酸伏诺拉生、奥美沙坦酯、苯磺酸氨氯地平、缬沙坦氨氯地平、肾上腺素注射液、克林霉素干混悬剂、地氯雷他定、泊沙康唑、利巴韦林、盐酸多巴酚丁胺、利多卡因、丙胺卡因、叶酸、替米沙坦、利伐沙班、维格列汀、磺胺二甲嘧啶、诺氟沙星、红霉素、三氨、硝苯地平、盐酸氯米帕明等50多种原料药和制剂。

二、案例分享

【项目名称】

双氯芬酸二乙胺乳胶剂中N-亚硝基双氯芬酸杂质研究

【项目难点】

（1）杂质限度较低，只有0.075ppm，需要较高的供试品浓度才能达到灵敏度，且杂质与主成分结构类似，易造成假阳性；

（2）杂质与主成分结构相似，出峰相近，不好分离；

（3）乳胶剂基质复杂，含大量的油脂，易产生基质效应、干扰杂质检测。

【解决途径及效果】

（1）采用三重四级杆-液相色谱质谱联用仪-ESI源进行检测，极大提供灵

敏度。检测限可做到0.007ppm；

（2）通过优化色谱条件，筛选色谱柱，将杂质和供试品较好地分离，避免了供试品受热分解成与杂质相似的碎片，进而造成假阳性；

（3）优化供试品的处理方式，避免基质进入到色谱柱和离子源产生污染或干扰。先对供试品进行溶解处理，然后过柱子进行除杂、富集，再与二氯甲烷进行萃取浓缩等方式，提高供试品溶液浓度的同时降低供试品的基质干扰。方法中的回收率可做到80%~95%之间，符合标准要求。下图为100%加标供试品溶液出峰情况。