在分子生物学实验中,RNA 的提取质量至关重要,而 RNA 酶污染是影响其质量的关键因素。了解 RNA 酶的特性并采取有效的防范措施,对于成功提取高质量 RNA 至关重要。
一、RNA 酶的特性及危害RNA 酶广泛存在且活性极强,具有高度稳定性,能在多种恶劣条件下存活,如高温、宽 pH 范围等,甚至煮沸后仍有部分活性。它能降解各种类型的 RNA,这使得 RNA 样本极易受到破坏,哪怕微量的 RNA 酶污染都可能导致实验失败,严重影响后续的基因表达分析、转录组学研究等工作。
二、摆脱 RNA 酶污染的方法(一)实验环境控制保持实验室清洁,定期用 RNA 酶清除剂擦拭台面,实验前后对实验室进行紫外线照射消毒,减少空气中 RNA 酶含量。
合理分区操作,将实验室分为样本制备区、RNA 提取区等,避免不同区域操作交叉污染,实验人员进入特定区域需更换专用服装并消毒。
(二)仪器设备处理金属仪器可高温烘烤,如在 180 - 200℃烤箱中烘烤 2 小时以上,使 RNA 酶变性失活。
塑料制品等用 RNA 酶抑制剂处理,如浸泡在 DEPC 处理水中过夜,注意 DEPC 有毒,需在通风橱操作。玻璃器皿清洗后用盐酸溶液浸泡去除 RNA 酶。
(三)试剂耗材选择与处理选购质量可靠、无 RNA 酶检测合格的试剂,注意有效期和保存条件。
一次性耗材选无 RNA 酶产品,或自行高压蒸汽灭菌处理。反复使用的耗材如研钵等使用后及时清洗并用 RNA 酶清除剂处理。
(四)操作过程注意事项严格无菌操作,在超净工作台或生物安全柜中进行,移液器使用时避免触碰其他物品防止交叉污染。
操作迅速准确,减少 RNA 样本与外界接触时间,如匀浆时控制好速度和时间,避免产生过多泡沫。
设立阴性对照,检测实验过程是否有 RNA 酶污染,若阴性对照出现异常结果,及时排查污染源并纠正。
通过以上多方面的综合措施,能有效摆脱 RNA 酶污染,为 RNA 提取实验的成功和后续研究的准确性提供有力保障。