上海富衡|提取RNA时如何避免RNA酶污染

小衡衡 2024-10-12 09:37:15

在分子生物学实验中,RNA 的提取质量至关重要,而 RNA 酶污染是影响其质量的关键因素。了解 RNA 酶的特性并采取有效的防范措施,对于成功提取高质量 RNA 至关重要。

一、RNA 酶的特性及危害

RNA 酶广泛存在且活性极强,具有高度稳定性,能在多种恶劣条件下存活,如高温、宽 pH 范围等,甚至煮沸后仍有部分活性。它能降解各种类型的 RNA,这使得 RNA 样本极易受到破坏,哪怕微量的 RNA 酶污染都可能导致实验失败,严重影响后续的基因表达分析、转录组学研究等工作。

二、摆脱 RNA 酶污染的方法(一)实验环境控制

保持实验室清洁,定期用 RNA 酶清除剂擦拭台面,实验前后对实验室进行紫外线照射消毒,减少空气中 RNA 酶含量。

合理分区操作,将实验室分为样本制备区、RNA 提取区等,避免不同区域操作交叉污染,实验人员进入特定区域需更换专用服装并消毒。

(二)仪器设备处理

金属仪器可高温烘烤,如在 180 - 200℃烤箱中烘烤 2 小时以上,使 RNA 酶变性失活。

塑料制品等用 RNA 酶抑制剂处理,如浸泡在 DEPC 处理水中过夜,注意 DEPC 有毒,需在通风橱操作。玻璃器皿清洗后用盐酸溶液浸泡去除 RNA 酶。

(三)试剂耗材选择与处理

选购质量可靠、无 RNA 酶检测合格的试剂,注意有效期和保存条件。

一次性耗材选无 RNA 酶产品,或自行高压蒸汽灭菌处理。反复使用的耗材如研钵等使用后及时清洗并用 RNA 酶清除剂处理。

(四)操作过程注意事项

严格无菌操作,在超净工作台或生物安全柜中进行,移液器使用时避免触碰其他物品防止交叉污染。

操作迅速准确,减少 RNA 样本与外界接触时间,如匀浆时控制好速度和时间,避免产生过多泡沫。

设立阴性对照,检测实验过程是否有 RNA 酶污染,若阴性对照出现异常结果,及时排查污染源并纠正。

通过以上多方面的综合措施,能有效摆脱 RNA 酶污染,为 RNA 提取实验的成功和后续研究的准确性提供有力保障。

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小衡衡

简介:一个从事生物科技,专注于细胞相关技术、服务的打工仔