背景概述

T7 RNA 聚合酶是在噬菌体 T7中发现的一个 99kDa 的单个亚基蛋白，是一种依赖 DNA 的 RNA 聚合酶，同时也是 T7 噬菌体编码的唯一 RNA 聚合酶。主要参与转录活性，不需要任何其他辅助转录因子，与细菌 RNA 聚合酶相比，T7 RNP 识别序列更具有特异性，转录的效率也更高。由于 T7 RNA 聚合酶的高活性的高保真度，很适合体外 RNA 的生产，因此在科研和商业化开发中得到了普遍应用。

mRNA药物生产流程包括基因合成，质粒 DNA 发酵，质粒DNA 纯化，mRNA 合成，mRNA 纯化和 LNP 包封纯化及制剂分装，其中 mRNA 合成是以线性化质粒 DNA 作为模板，T7 RNA 聚合酶作为主要原料进行的一系列的酶促过程，在 IVT 过程中，RNA 聚合酶负责从DNA 模板转录 RNA。对于 mRNA 成品药物来说，T7 RNA 聚合酶残留是一种生产工艺相关杂质，T7 RNA 聚合酶可与 mRNA 一起通过 LNP 包封进入细胞释放，可被视为外来抗原，其可与互补抗体结合，诱导促炎细胞因子，作为适应性免疫反应的一部分，并导致炎症，从而连带引发 mRNA 的降解。因此需要更强大的评估方法来检测其残留情况，确保最终产品的质量和安全。

相关法律规定

CDE发布的指导原则《新型冠状病毒预防用 mRNA 疫苗药学研究技术指导原则（试行）》指出：应对工艺步骤产物进行过程控制检测，如加帽率、加Poly(A) 尾产物长度、mRNA 序列完整性、序列准确性、纯度、mRNA浓度、副反应产物浓度(不完整RNA、双链 RNA、截短 RNA、长链 RNA 等)、残留蛋白、残留 DNA、无菌、内毒素等。

目前针对工艺中残留蛋白，可以采用 nanoorange 检测总蛋白含量，nanoorange 是一种新型的荧光染料，其分子结构为双氧环己基羧酸酯（DOC）。当  DOC 与蛋白质结合时，DOC 分子中的苯环靠近蛋白质分子中的芳香族氨基酸残基（如色氨酸和酪氨酸），从而使荧光强度增加，这种荧光增强效应与蛋白质的含量成正比。

然而，nanoorange 检测的结果是 IVT 原液中所有蛋白的残留，包括内切酶蛋白残留，无机焦磷酸酶蛋白残留，T7 RNA 聚合酶蛋白残留等。其中，T7 RNA聚合酶是mRNA药物制备过程中最主要的原料之一，是mRNA疫苗和药物研发的核心酶。对T7  RNA 聚合酶蛋白残留进行精准监测可以更有效把控mRNA制备和生产工艺。美国药典（USP）最新发布的《mRNA 疫苗质量分析方法-指南草案》指出：需要对整个工艺进行质量控制，保证质量有效、安全可控。其指导原则中明确规定，需要对其生产工艺相关杂质进行检测，对主要杂质进行监测与分析，包括 dsRNA 残留，DNA 模板残留和T7RNA 聚合酶残留等，该法规第一次对单酶蛋白残留杂质层面提出要求，进一步加强了对 mRNA 药物工艺杂质的监管。

mRNA药物关键酶残留检测利器1h轻松搞定！

瀚海新酶按照《mRNA 疫苗质量分析方法-指南草案》推荐方法，自主研发推出T7 RNA聚合酶残留检测试剂盒（ELISA 法），采用双抗体夹心酶联免疫法，检测 T7 RNA 聚合酶的残留量，准确测定 T7 RNA 聚合酶特异性残留蛋白，可以更细致的了解工艺杂质。

检测流程

产品性能

操作简便

01一步法，仅需一次加样，一次洗板，即可进行显色

02检测时间短，反应总时间为1h 15min

03无需使用振板

系统适应性优异

01试剂盒标准曲线线性良好，R^2＞0.99

02检出限＜0.1ng/ml

03定量限可以做到 0.25ng/ml，测值 CV＜10%，测值回收率在80%-120% 范围内

04试剂盒重复性及准确度良好，测值 CV＜10%，测值回收率在 80%-120% 范围内

特异性好

瀚海新酶的 T7 RNA 聚合酶残留检测试剂盒只特异性识别 T7 RNA 聚合酶，其他 IVT 工具酶对测值无干扰。

适配性好

瀚海新酶试剂盒适配市面上大多数 T7 RNA 聚合酶。

抗干扰性能优良

瀚海新酶试剂盒适配市面上大多数 T7 RNA 聚合酶。

测值重新性好

实际样本测值

不同工艺阶段mRNA样本的T7RNA聚合酶残留实际测值检测

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