人正常表皮角质形成细胞（HNEpC）培养是一项精细且关键的实验操作，以下是一份详细攻略。

细胞复苏时，从液氮罐中迅速取出冻存的 HNEpC 细胞，立即放入 37℃水浴锅中，轻轻晃动，使其在 1-2 分钟内快速解冻。随后将细胞悬液转移至含有适量培养基的离心管中，1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，置于 37℃、5% CO₂培养箱中培养。

培养基的选择至关重要，推荐使用添加了表皮生长因子（EGF）、牛垂体提取物（BPE）、胰岛素、氢化可的松等成分的角质形成细胞专用培养基，以满足 HNEpC 细胞生长和增殖的特殊需求，维持其正常的表型和功能。培养过程中，需密切关注细胞的生长状态，每 2-3 天更换一次培养基，避免细胞代谢产物积累对细胞造成损伤。

当细胞生长至 80%-90% 汇合度时，进行传代操作。先用 PBS 缓冲液轻轻冲洗细胞 2-3 次，去除残留的培养基和血清，然后加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液，覆盖瓶底，在显微镜下观察，当细胞变圆、间隙增大时，立即加入含有血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱离瓶壁，收集细胞悬液，按一定比例进行传代接种。

HNEpC 细胞对培养环境较为敏感，应保持培养箱内温度稳定在 37℃，CO₂浓度精确维持在 5%，并定期对培养箱进行清洁和消毒，防止微生物污染。同时，操作过程要严格遵循无菌原则，所有实验器材和试剂都需经过灭菌处理，操作人员也要穿戴好无菌服、口罩和手套，避免细胞受到污染，从而确保 HNEpC 细胞培养的成功，为后续的实验研究提供可靠的细胞模型。