Simoa(Single-molecule Array)技术是由美国Quanterix公司研发生产的一款超高灵敏度单分子蛋白质检测技术,采用经典的双抗夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)实现极低含量的蛋白定量检测。其关键技术在于将免疫复合物捕获并密封在一个飞升级别的小孔中反应,以实现单个分子的检测,大幅提升检测灵敏度,比传统ELISA方法灵敏度高出1000倍,检测下限达到fg/mL,实现了超低丰度蛋白的有效检测和定量,为低丰度炎症因子的实时监控提供了技术支撑。
芯弃疾JX-8B数字ELISA与传统免疫试验主要区别在于能够在飞升大小的孔中捕获单个分子,允许单个磁珠信号的数字化读取。用特异性抗体修饰的微珠捕获靶标生物标志物,在生物标志物浓度很少时,每个珠子能捕获一个或零个靶蛋白质分子,通过免疫反应后形成免疫复合物,然后用能够产生荧光产物的量子点报告信号。通过把单个珠子限定在飞升反应室中,通过微阱芯片结构“卡住”微珠,使得微珠阵列化排布的方式,使用荧光成像来检测单个格子的荧光信号进行最后定量。这种一个阵列化区域预埋一种特异性抗体修饰的微珠,一个通道内可以设计多个这样的阵列化区域,不同区域间预埋不同捕获抗体的微珠。这种基于酶联免疫吸附试验的数字化单分子检测方法(Digital ELISA)在几十微升的样品中检测到少至约 10-20个量子点标记的复合物。
芯弃疾JX-8B数字ELISA超敏功能:芯弃疾.数字ELISA,与Simoa同样的检测方案,将检测结果二维化;
使用成像方式,可精确量检测区多少个微球载体上发生免疫反应,具有阳性荧光信号,
理论可达fg级;
使用常规ELISA试剂,测试IL-6等演示指标,也可轻松达到亚pg级(0.2-0.5pg/mL)
数字 ELISA 试剂盒的优点
节省时间 - 从样品到结果只需30分钟
节省样本 - 只需低至10μL的样品体积
多重检测 - 同时检测10种生物靶标
高灵敏度 - 精确定量下限低至0.2pg/mL
高通量- 可选择4,8,16通道芯片同时检测
操作简便 - 全自动化仪器加样清洗,或者选择人工加样清洗
芯弃疾JX-8B与Luminex,MSD,Simoa,传统ELISA不同检测蛋白技术比较,在灵敏度,检测时间,检测成本上更显优势。
芯弃疾JX-8B数字ELISA与Simoa 工作流程步骤的比较表。
芯弃疾JX-8B数字ELISA试剂盒的5个步骤
Simoa需 6 个步骤
1.样本和标记抗体的量子点混合孵育5-10min
1.利用表面标记有捕获抗体的磁珠捕获样品中的抗原
2.全自动化加样或者移液枪加样
2.使用biotin标记的检测抗体对被捕获的抗原进行标记
3.孵育5-10min
3.加入链霉亲和素-半乳糖苷酶复合物,与检测抗体上的biotin结合
4.清洗10min
4. 将反应洗净后的磁珠与底物混合,加载到含有微孔阵列的检测芯片中,利用磁场使磁珠落入与其尺寸完全匹配的微孔中(3μm左右),加入油相,使得微孔之间物理隔离
5.拍照计数
5.含有半乳糖苷酶的微孔由于酶分子催化底物产生荧光产物
6.对微孔阵列进行荧光成像,通过对发出荧光信号的微孔个数对照标准曲线来实现定量检测。
芯弃疾JX-8B和Simoa主要参数对比。
比较项目
芯弃疾JX-8B
Simoa
最低检测下限
0.2 pg/mL
0.002 pg/mL
耗时
0.5 h
1-1.5 h
所需样品体积
10 μL
1-100 μL
理论重数
10
10
线性范围
4 log
2～4 log
设备耗材成本
低(包括全自动加样仪+荧光扫描仪)
超高
Simoa 可检测非常低浓度的分析物,产品开发较成熟,但是检测操作流程过于繁琐复杂,单次检测耗时长达1h以上,使用的盘式微流控芯片加工精度高,生产成本高昂。
芯弃疾JX-8B检测成本大大降低到Simoa的十分之一,检测时间缩短到0.5h,提高检测的效率,灵敏度达到亚飞克级别,满足大多数的项目检测要求。
高品质数字 ELISA 试剂盒可帮助您稳定、可靠、快速地检测10种特异性靶标蛋白。4,8,16通道数字ELISA 试剂盒可供选择,包括完整组分的即用型SA-Biotin试剂盒,可自行优化检测方法的整套试剂,以及试剂技术支持,可选择购买自动加样设备或手动加样,为您的研究项目提供灵活性和便利性。
